■ 基本信息
細(xì)胞名稱: | NIH/3T3小鼠胚胎細(xì)胞 |
背景資料: | NIH/3T3是從NIH Swiss小鼠胚胎培養(yǎng)物中建立的高度接觸性抑制的連續(xù)傳代細(xì)胞株。為了培育在形態(tài)學(xué)特征上更適合于進(jìn)行轉(zhuǎn)化分析的亞株，建立的NIH/3T3細(xì)胞株又進(jìn)行了5輪以上亞克隆。該細(xì)胞株對(duì)肉瘤病毒的轉(zhuǎn)化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感，對(duì)DNA轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)染研究十分有用。鼠痘病毒陰性。 |
細(xì)胞來(lái)源: | ATCC CRL-1658 |
代次: | P3 |
規(guī)格: | ①1ml凍存 ②T25復(fù)蘇 |
細(xì)胞數(shù): | 1x10^6 cells |
生物安全級(jí)別: | 2 |
組織來(lái)源: | 胚胎 |
細(xì)胞形態(tài): | 貼壁；成纖維細(xì)胞樣 |
細(xì)胞活力: | 95％（Viability by Trypan Blue Exclusion） |
細(xì)胞檢測(cè): | 細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌 |
培養(yǎng)條件: | DMEM(高糖) +10% FBS+1%P/S；37℃，5% CO2 |
傳代方法: | 建議1:2-1:3 兩天換液一次 |
凍存條件: | 90%FBS+10%DMSO |
■ 運(yùn)輸
凍存細(xì)胞：干冰運(yùn)輸，液氮保存（或-80℃冰箱不超過(guò)1周）
復(fù)蘇細(xì)胞：常溫運(yùn)輸
T25 瓶細(xì)胞處理方法：
收到細(xì)胞后，檢查外包裝是否完整，細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好。如有破損漏液等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。正常請(qǐng)進(jìn)行以下操作：
1）75% 酒精棉球擦拭 T25 細(xì)胞培養(yǎng)瓶外部。
2）將細(xì)胞放入 37 度培養(yǎng)箱中預(yù)溫 3-4 小時(shí)后再做處理，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3）顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（40×,100×,200× 各一張）
前三天照片為重要售后依據(jù)，不提供或未拍照默認(rèn)收到狀態(tài)良好。
4）貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度較小，無(wú)菌操作，去掉培養(yǎng)基。每瓶添加第三步中準(zhǔn)備的 5-6ml 培養(yǎng)基。放到 37 度培養(yǎng)箱培養(yǎng) 。待細(xì)胞密度達(dá)到 80% 以上，進(jìn)行傳代。密度達(dá)到 80% 以上，將細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
懸浮細(xì)胞：將瓶?jī)?nèi)所有培養(yǎng)基離心收集，重懸計(jì)數(shù)根據(jù)密度進(jìn)行分瓶，密度在3x105/ml 為宜。
收到第一次傳代比例建議 1:2，之后可根據(jù)細(xì)胞密度和增殖情況適當(dāng)調(diào)整。
注：
培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)非完全培養(yǎng)基，請(qǐng)務(wù)必使用新鮮培養(yǎng)基。 收到細(xì)胞后如細(xì)胞狀態(tài)不佳或培養(yǎng)中遇到問(wèn)題，請(qǐng)當(dāng)天反饋并提供圖片，且保存前三天照片以便分析。7 天內(nèi)反饋，細(xì)胞本身問(wèn)題免費(fèi)重發(fā)如人為原因?qū)е驴筛鶕?jù)實(shí)際情況酌情處理；7 天內(nèi)未接到任何反饋視為合格，不予免費(fèi)售后。
凍存管收到處理方法：
收到細(xì)胞后，檢查外包裝情況和箱內(nèi)是否還有干冰。如有外包裝破損干冰已完全揮發(fā)等問(wèn)題，請(qǐng)即時(shí)聯(lián)系。正常請(qǐng)進(jìn)行以下操作：檢查干冰揮發(fā)情況，將細(xì)胞取出轉(zhuǎn)移至 -80 度冰箱 ( 不超過(guò)一周）或液氮保存 ,建議盡早復(fù)蘇。復(fù)蘇后有活性狀態(tài)問(wèn)題及時(shí)與我們聯(lián)系，免費(fèi)重發(fā)一管并有技術(shù)人員與您溝通指導(dǎo)復(fù)蘇第二管。
